מכאן שהרפואה המשולבת, זו המנסה לעשות שימוש בשני העולמות, הקונבנציונלי והאלטרנטיבי, מתמקדת באדם לא פחות מאשר במחלה. ...
מתוך הערך: המדריך לטיפול בסוכרת

היברידיזציה של דנ"א ושימוש באנזימי הגבלה לבדיקות גנטיות - DNA hybridization and the use of restriction enzymes for genetic testing

מתוך ויקירפואה


היברידיזציה של דנ"א ושימוש באנזימי הגבלה לבדיקות גנטיות
DNA hybridization and the use of restriction enzymes for genetic testing
Restriction enzyme.jpg
אופן החיתוך של האנזים Eco RI
יוצר הערך פרופ' מוטי שוחט
 


לערכים נוספים הקשורים לנושא זה, ראו את דף הפירושיםבדיקות גנטיות

אנזימי הגבלה (Restriction enzymes) הם בדרך-כלל אנדונוקלאזות (Endonucleases), המהוות חלק ממנגנון ההגנה של חיידקים נגד פלישת גורמים המכילים DNA‏ (DeoxyriboNucleic Acid). האנזים חותך את ה-DNA באתר קבוע לאחר שהוא מזהה קטע הסגולי לו (באורך 4–7 בסיסים, בדרך-כלל). מוכרים היום מעל ל-200 אנזימים כאלו היכולים לזהות 90 אתרים סגוליים שונים.

Southern blots

לאחר הפעלת אנזימי חיתוך משני צידי קטע DNA המכיל את הגן (Gene) הרצוי, מריצים את הקטעים המתקבלים באלקטרופורזה (Electrophoresis) על אגרוזה-ג'ל (Agarose gel) ומקבלים הפרדה לפי גודל המקטעים השונים. לאחר השרייה בתמיסה בסיסית (המעבירה את ה-DNA הדו-גילי ל-DNA חד-גילי) מניחים את האגרוזה-ג'ל בתמיסת מלח בריכוז גבוה. מניחים נייר של ניטרוצלולוזה (Nitrocellulose) על הג'ל ונייר סופג מעליו. ה-DNA החד-גילי עולה עם המים מתמיסת המלח ונקשר לנייר הניטרוצלולוזה.

התוצאה היא העתק של סידור ה-DNA שהיה בג'ל על פלטת הניטרוצלולוזה. הוספת mRNA‏ (Messenger RiboNucleic Acid) או DNA הסגולי לגן הנבדק תגרום להצמדת (Hybridization) הגלאי למקטע המכיל גן זה. סימון רדיואקטיבי של הגלאי מאפשר זיהוי ישיר של הגן המבוקש, וקריאה מידית של משקלו המולקולרי. גן זה יופיע במקטע בעל משקל מולקולרי אחר, אם משתמשים באנזים חיתוך שונה. גלאים סגוליים לגן מסוים מופקים מסחרית באמצעות "השתלת" מקטעים (בשיטות הנדסה גנטית) מהגן האנושי לפלזמיד (Plasmid) של חיידק או נגיף, ואלו מכפילים עצמם עצמאית. ניתוח של גן בשיטה זו נמשך בדרך-כלל עד 10 ימים, ואיכותו נקבעת לפי הסגוליות הרדיואקטיבית של הגלאי, סוג נייר הניטרוצלולוזה ומשך החשיפה.

באותה צורה ניתן לעשות היברידיזציה במקום DNA עם ה-RNA‏ - Northern blots, או עם החלבון - Western blots.

דוגמה ליישום שיטה זו בקליניקה היא בדיקת תסמונת ה-X השביר - בבדיקת Southern blot ניתן לקבוע את גודל אזור "החזרות" בגן, ומעל לגודל מסוים מדובר בתסמונת X-שביר.

ביבליוגרפיה

  • Buyse ML. Birth Defects Encyclopedia. Center of Birth Defects Information Services, Inc.
  • Emery AE, Rimoin DL. Principles and Practice of Medical Genetics. Churchill Livingstone,
  • Harper PS. Practical Genetic Counseling.. Butterworth-Heinemann Ltd.
  • Jones KL. Smith's Recognizable Patterns of Human Malformation. W.B. Saunders Comp. Philadelphia.
מקורות נוספים

אנציקלופדיה גנופדיה - למידע המיועד לציבור הרחב: אנציקלופדיה גנטית לייעוץ גנטי, מחלות גנטיות ובדיקות גנטיות בשפה העברית ובצורה המתאימה גם למידע עבור המשפחות


המידע שבדף זה נכתב על ידי פרופ' מוטי שוחט (יוצר\י הערך)